期刊简介
本刊创刊于1985年2月。属国家科技部中国科技论文统计源期刊，入编中国学术期刊（光盘版）。以印刷版、光盘版、网络版同时向国内外公开发行。本刊贯彻“注重临床，为临床第一级服务”的办刊宗旨，确保“五湖四海”的办刊思想，主要报道与临床相结合的科研成果，技术革新和学术动态等。
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首页>临床口腔医学杂志
- 杂志名称：临床口腔医学杂志
- 主管单位：中华人民共和国教育部
- 主办单位：华中科技大学同济医学院附属同济医院;中华口腔医学会口腔黏膜病专业委员会;中华医学会武汉分会
- 国际刊号：1003-1634
- 国内刊号：42-1182/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：国家科技部中国科技论文统计源期刊期刊收录：统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中), 知网收录(中)
TK基因重组质粒的构建及在ACC-2细胞中的表达
黄圣运；张东升；刘桂军；牟文丽；张世周；张捷
关键词：胸腺嘧啶核苷激酶, 自杀基因, 核酸内切酶, 转染, 腺样囊性癌
摘要：目的 克隆胸腺嘧啶核苷激酶(TK)基因,构建质粒表达载体pIRES-TK,并利用该载体转染ACC-2细胞,建立了稳定表达TK基闪的ACC-2细胞克隆.方法 通过PCR从逆转录病毒重组体pLNSX-TK中扩增出TK基因全长序列,将扩增产物定向插入到克隆载体pMD18-T中进行序列测定,测序正确后将其亚克隆到质粒表达载体pIRES中,构建重组表达载体pIRES-TK,用电穿孔法以该质粒转染ACC-2细胞,经G418筛选获得稳定表达TK基因的ACC-2细胞株,提取该细胞株的总RNA,用RT-PCR检测TK基因的表达.结果 PCR扩增出1128 bp大小的片段,测序结果与GeneBank报道的TK序列基本一致;阳性重组质粒pIRES-TK经XhoI和MulI双酶切后获得2692 Bb和1128 bp的片段:RT-PCR从转染细胞的总RNA中扩增出361 bp的预期片段.结论 成功扩增了TK基因的DNA片段;成功构建了质粒表达载体pIRES-TK:建立了稳定表达TK基因的ACC-2细胞株,为TK/GCV自杀基因系统在腺样囊性癌基因治疗中的应用奠定良好的基础.
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